Исследование фагоцитарной активности лейкоцитов – анализ крови, который направлен на определение резервных возможностей нейтрофилов и моноцитов к выполнению их основной функции – поглощению и переработке чужеродных агентов. Тест выполняется в комплексе иммунограммы. Он показан пациентам с рецидивирующими и хроническими инфекциями, приобретенными и генетическими иммунодефицитными состояниями, аутоиммунными и онкологическими заболеваниями, перенесшим сложные операции, в том числе по трансплантации органов. Анализу подвергается цельная кровь. Исследование основано на оценке фагоцитоза бактерий с флуоресцентными метками. В норме фагоцитирующие гранулоциты составляют от 82 до 90% от общего количества, фагоцитирующие моноциты – от 75 до 85%. Готовность результатов – до 8 дней.

Фагоцитарная активность лейкоцитов – лабораторный показатель, который отражает процент нейтрофилов и моноцитов, способных к связыванию с патогенной микрофлорой и ее перевариванию. Фагоциты – клетки, которые защищают организм от развития инфекций. Они считаются компонентом врожденного иммунитета, в крови представлены двумя видами лейкоцитов – моноцитами и нейтрофилами. Моноциты являются крупными клетками – макрофагами. Они обладают выраженной способностью к поглощению, перерабатывают большие по размерам клетки и органические соединения. В месте воспаления они фагоцитируют бактерии, лейкоцитарную массу, пораженные клетки. В результате ткани очищаются и подготавливаются к регенерации. Нейтрофилы относятся к микрофагам, в отличие от моноцитов поглощают только небольшие клетки и органические компоненты. После переработки агентов нейтрофилы гибнут, высвобождают вещества, которые повреждают бактерии и грибки, усиливают приток иммунных клеток к очагу воспаления.

Анализ крови на фагоцитарную активность лейкоцитов позволяет оценить резерв моноцитов и нейтрофилов к перевариванию чужеродных агентов. Изменение характеристик фагоцитов отражает не только иммунологическую реактивность организма, но и особенности некоторых других процессов – белкового и углеводного обмена, наличие интоксикации и истощения организма, активность восстановления после заболеваний и т. д. Таки образом, анализ применяется не только в иммунологии и инфекционистике, но и в ревматологии, онкологии, хирургии. Результаты исследования отображаются как процент активных фагоцитов к их общему количеству. Выявление активных нейтрофилов и моноцитов производится с помощью бактерий с флуоресцентными метками. Биоматериалом для исследования является цельная кровь с гепарином.

Показания

Исследование фагоцитарной активности лейкоцитов показано при подозрении на врожденный или приобретенный иммунодефицит. Оно назначается при затяжных, хронических и рецидивирующих инфекционных заболеваниях – характерном признаке снижения иммунитета. Чаще всего на анализ направляются пациенты с пневмонией, синуситом, отитом, энтероколитом, кандидозом, циститом. Также о недостаточности иммунной защиты могут свидетельствовать длительно незаживающие раны, осложнения после операций. Поэтому анализ выполняется при подготовке к хирургическому вмешательству и при осложненном течении послеоперационного периода, при длительном восстановлении после травм и ожогов. К другим показаниям для данного исследования относятся аллергические, аутоиммунные и онкологические заболевания. Результаты позволяют оценить активность иммунной защиты (фагоцитоза) и ее роль в развитии болезни.

Анализ крови на фагоцитарную активность лейкоцитов дает возможность определить фактическую готовность организма к противостоянию инфекциям. Однако стоит помнить, что этот показатель изменяется под влиянием многих факторов. Так, активность моноцитов и нейтрофилов снижается после физической нагрузки и при умственном утомлении, а после приема калорийной пищи повышается. Еще одним ограничением анализа является то, что процедура исследования занимает до 8 рабочих дней, полученные результаты отражают состояние недельной давности.

Подготовка к анализу и забор материала

Для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов производится забор крови из вены. За день до анализа нужно исключить из рациона алкоголь, отменить спортивные тренировки и другие интенсивные физические нагрузки, избегать стрессовых ситуаций. Также необходимо проконсультироваться с врачом о влиянии принимаемых лекарств на результат исследования, возможно, некоторые препараты будут временно отменены. Процедура забора крови, как правило, производится с утра, после ночного периода голодания или через 4 часа после приема пищи.

Кровь берется из локтевой вены с помощью пункции, для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов чаще всего используется метод оценки фагоцитоза бактерий с флуоресцентной меткой. Из крови путем центрифугирования и отмывания выделяют моноциты и нейтрофилы – исследуемый материал. Затем в образец вводят культуру люминесцентных бактерий, смесь ресуспендируют и инкубируют, по интенсивности люминесценции определяют количество лейкоцитов, фагоцитировавших бактерии. Результаты анализа подготавливаются в течение 7-8 рабочих дней. Фагоцитарная активность моноцитов и нейтрофилов может быть определена и другими методами, например, окрашиванием фагоцитировавших клеток (метод Романовского-Гимзы), по активности лизосомальных ферментов, производству цитокинов, присутствию катионных белков.

Нормальные значения

Результат анализа крови на фагоцитарную активность лейкоцитов выражается в процентах фагоцитирующих клеток от их общего количества. Значения нормы для гранулоцитов – от 82 до 90%, для моноцитов – от 75 до 85%. Эти показатели одинаковы для пациентов всех возрастов и обоих полов. Физиологическое снижение фагоцитоза может определяться во время беременности, после физической нагрузки, не соответствующей уровню подготовки, и после эмоционального стресса.

Повышение и снижение показателя

Повышение фагоцитарной активности лейкоцитов не имеет диагностической значимости, причиной могут стать острые инфекции. Активность моноцитов и нейтрофилов увеличивается относительно исходного уровня.

Анализ фагоцитарной активности лейкоцитов относится к иммунологическим методам исследования. Его показатели позволяют определить резервные способности клеток крови к поглощению и перевариванию инфекционных агентов, то есть готовность организма противостоять развитию заболевания. Если результаты анализа ниже нормы, необходимо проконсультироваться с лечащим врачом – иммунологом, инфекционистом, хирургом, ревматологом, онкологом. Физиологическое снижение показателей можно скорректировать правильным подбором физической нагрузки, профилактикой стресса.

4.4.6 Определение фагоцитарной активности клеток крови

Принцип метода. Метод основан на явлении фагоцитоза – реакции организма, проявляющейся в способности клеток-фагоцитов захватывать и переваривать чужеродные микроорганизмы.

Реактивы: 1. Стабилизатор крови.

2. Взвесь суточной микробной культуры (0,5-1 млрд.м.к./мл) в физрастворе.

Ход определения. В стерильные центрифужные пробирки наливают по 0,5 мл стабилизированной исследуемой крови и 0,5 мл микробной взвеси, содержащей по оптическому стандарту мутности 0,5-1 млрд. микробных клеток в 1 мл.

В зависимости от задач и целей исследований в работе могут быть ис-пользованы различные виды живых или убитых микроорганизмов: ки-шечная палочка, стафилококк, стрептококк и т.п.

Пробирку с приготовленной смесью осторожно встряхивают, поме-щают на 30 мин в термостат или водяную баню, отрегулированную на 37°С. По истечении указанного срока из смеси делают 3-5 мазков (по спо-собу приготовления мазков крови), фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимзе.

Расчет: Фагоцитарная активность лейкоцитов. Фагоцитарная ак-тивность выражается процентом активных лейкоцитов (фагоцитов) в об-щем числе подсчитанных нейтрофильных лейкоцитов. Из числа подсчи-танных 100 нейтрофилов выводится их процентное соотношение, т. е. лей-кограмма. По найденным 100 фагоцитам определяют число клеток, участ-вующих в фагоцитозе (захвативших определенное количество микробов). Полученный результат выражают в процентах.

Фагоцитарный индекс определяется средним числом фагоцитиро-ванных микробов, приходящихся на один активный лейкоцит. Этот пока-затель характеризует интенсивность фагоцитоза. Для определения фагоци-тарного индекса используют те же мазки крови, по которым определялась фагоцитарная активность лейкоцитов. В препаратах, приготовленных опи-санным выше способом, подсчитывают не менее 100 лейкоцитов и количе-ство поглощенных ими микробных тел. Вычисляется фагоцитарный индекс путем деления числа фагоцитированных бактерий на число активных лей-коцитов.

Фагоцитарное число является дополнительным показателем, харак-теризующим как агрессивность нейтрофилов, так и их активность. Вычис-ляется фагоцитарное число путем деления числа фагоцитированных бакте-рий на общее число подсчитанных лейкоцитов.

Фагоцитарная емкость определяется количеством микробных кле-ток, фагоцитированных лейкоцитами в 1 мм3 крови. Этот показатель ха-рактеризует общую фагоцитарную активность крови и зависит от количе-ства лейкоцитов, содержащихся в I мм3. Некоторые авторы этот показатель называют фагоцитарной интенсивностью, абсолютным фагоцитозом или общим фагоцитозом. Вычисляется фагоцитарная емкость умножением фа-гоцитарного числа на количество лейкоцитов в 1 мм3 крови.

При высокой функциональной активности фагоцитов процесс перева-ривания захваченных микробов начинается немедленно, и уже в первые 30 мин. отмечают не только визуальное изменение микробной клетки, но и преобразование некоторых нейтрофильных лейкоцитов (набухание, изме-нение очертания ядра, слабое прокрашивание и т.д.), т.е. появляются при-знаки, характеризующие автолиз (самораспад) и начало деструкции нейтрофила. В течение 2 ч фагоцитарная реакция в норме заканчивается перевариванием захваченных микробов и разрушением полиморфноядер-ных фагоцитов.

Для количественной оценки переваривающей способности фагоцитов введено понятие индекса завершенности фагоцитоза (ИЗФ), для этого определяют полусумму отношений фагоцитарной активности нейтрофи-лов, полученной через 30 мин. инкубации к фагоцитарной активности нейтрофилов, полученной через 2 ч, и отношения фагоцитарных индексов в эти же сроки. Принято считать, что при ИЗФ 1 и больше реакция счита-ется завершенной, а меньше 1 – незавершенной.

Описание

Подготовка

Показания

Интерпретация результатов

Описание

Метод определения Оценка фагоцитоза бактерий с флюоресцентной меткой.

Исследуемый материал Цельная кровь (гепарин)

Доступен выезд на дом

Фагоциты являются одним из главных компонентов врождённого иммунитета. Они обеспечивают первую линию в защите организма от инфекции. В основе защитной функции лейкоцитов лежит фагоцитарный процесс, заключающийся в их способности распознавать, поглощать, убивать и переваривать чужеродные клетки. Как высокочувствительный индикатор нормы и патологии, характеристики фагоцитов служат полезным инструментом не только иммунологической, но и общеклинической диагностики. Данные по фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов (содержание клеток, фагоцитировавших при инкубации бактерии с флюоресцентной меткой) позволяют оценить резервные возможности этих клеток по поглощению и перевариванию чужеродных агентов.

Литература

1. Dufour D. Clinical use of laboratory data: a practical guide. - Williams & Wilkins. - 1998
2. Tietz Clinical guide to laboratory tests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B.- USA,W.B Sounders Company, 2006
3. Иммунологические методы./Под ред. Г. Фримеля – М., Мир - 1979.
4. Клиническая иммунология и аллергология/ Под ред. Г. Лора-младшего, Т. Фишера, Д. Адельмана. Пер. с англ. – М. Практика. 2000.
5. Лимфоциты. Методы./Под ред. Дж. Клауса.- М., Мир -1990.
6. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. Казань:Магариф. – 1993.
7. Ройт А., Бростофф Д., Дейл Д. Иммунология – М., Мир. – 2000.
8. Симонова А.В. Фенотип лимфоцитов при воспалительных заболеваниях. – М., ИНТО. 2001. – 250 с.
9. Ярилин А. А. Основы иммунологии – М., Медицина. - 1999.

Подготовка

Строго натощак (в период с 7.00 до 11.00) после ночного периода голодания от 8 до 14 часов.

Накануне исследования необходимо исключить повышенные психоэмоциональные и физические нагрузки (спортивные тренировки), приём алкоголя, за час до исследования - курение.

Показания к назначению

• Рецидивирующие инфекции, инфекционные заболевания с хроническим и затяжным течением.
• Подозрение на генетически обусловленный или приобретённый иммунодефицит.
• Аутоиммунные заболевания.
• Онкологические заболевания.
• Обследование реципиентов до и после трансплантации органов.
• Обследование пациентов перед серьёзными оперативными вмешательствами. Осложнённое течение послеоперационного периода.
• Контроль терапии цитостатиками, иммунодепрессантами и иммуномодуляторами

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения в Независимой лаборатории ИНВИТРО:

• % фагоцитирующих гранулоцитов от общего количества гранулоцитов;
• % фагоцитирующих моноцитов от общего количества моноцитов.

Референсные значения:

• % фагоцитирующих гранулоцитов: 82 - 90%;
• % фагоцитирующих моноцитов: 75 – 85%.

Благодаря существующим ныне медицинским технологиям и силе человеческой мысли диагностика заболеваний достигла впечатляющих успехов. К примеру, определить состояние иммунной системы человека возможно измерением количества лейкоцитов в крови. Как известно, лейкоциты, называемые еще «белой кровью» от латинского leiko- белая, kytos- клетка, защищают человеческий организм от вредоносных интервентов. Их главная функция - создать своеобразную оборонную линию от болезнетворных вирусов и бактерий, токсических веществ, инородных тел и шлаков.

Своя задача есть у каждого . Одни из них активны в поиске посторонних элементов в организме. У других задача состоит в том, чтобы определить этот элемент на предмет «свой - чужой». Третий вид белых клеток настроен на передачу информации о работе лейкоцитов молодым клеткам, создавая так называемую «оборонную память». И последний аккорд в защите иммунной системы играют клетки, поглощающие вредоносные тела. Макрофаги полностью вбирают в себя интервента и растворяют его.

Метод исследования фагоцитарной активности лейкоцитов

Нейтрофилы в крови, хоть и называются белыми тельцами, на самом деле под микроскопом имеют розово-фиолетовый цвет. Природную естественную защиту организма запрограммированные клетки осуществляют при помощи множественных гранул, содержащих биологически активные элементы.

Разновидности лейкоцитов

В медицинской терминологии существует пять наименований «белых клеток» лейкоцитов (приведено их процентное содержание в норме):

• Нейтрофилы - ликвидируют болезнетворные бактерии, найденные в кровотоке - 55%;
• Лимфоциты - ответственны за память иммунной системы - 35%;
• Моноциты - вбирают в себя элементы посторонних агентов - 5%;
• Эозинофилы - борются с возбудителями аллергии - 2,5-3%;
• Базофилы - оказывают помощь в поиске чужеродных элементов другим лейкоцитам, от 0,5-1%.

Лейкоциты способны к фагоцитозу. Фагоцитируют макрофаги в зависимости от состояния крови и нервной напряженности. Как правило, при начальной стадии заболевания количество нейтрофилов в крови человека растет, они борются и справляются с инородными болезнетворными агентами. К хроническому их повышению приводит неправильное лечение антибиотиками.

Анализ и подсчет

Анализ требует предварительной подготовки: голодание несколько часов, абсолютная трезвость (употребление алкоголя и курение запрещено).

Определение фагоцитарной активности лейкоцитов проходит в несколько этапов:

• Берут массу с 1-2 млрд микробных тел в 1 мл жидкости.
• Перемешивают 2% раствор лимоннокислого натрия, кровь и микробную массу в соотношении 1:2:1. Помещают смесь в термостат при температуре 40,5 °С на 30 минут.
• Затем смесь центрифугируют на 1500 оборотов в минуту 10 минут, и уже на чашку Петри или на тестовое стекло снимают слои пипеткой.
• Фиксируют слои метиловым спиртом на протяжении 3-5 минут.
• После окрашивают по Романовскому-Гимзе на протяжении 10 минут.
• Высчитывают результат реакции. Под микроскопом подсчитывают 100 фагоцитарных клеток, поглотивших либо нет микробы, учитывая количество микробов в клетке и насыщенность их окраски (переваривание).
• На мазках через полчаса и два часа вычисляется количество фагоцитов, поглотивших микробы, к общему числу просмотренных клеток – фагоцитарный индекс (ФИ30 и ФИ120).

Общее число поглощенных микробов делят на количество клеток, участвующих в фагоцитозе и получают фагоцитарное число (ФЧ). Эта цифра показывает, сколько микробов находится внутри одного фагоцита в среднем. Показатель тоже оценивается через полчаса (ФЧ30) и два часа (ФЧ120).

Индекс бактерицидности фагоцитов находят, разделив количество уничтоженных микробов на количество поглощенных и умножив получившуюся цифру на сто.

С целью оценки качества работы фагоцитов внесено понятие индекса завершенности фагоцитоза. Он представляет собой среднее количество поглощенных микробов через полчаса, отнесенное к среднему количеству поглощенных микробов через 2 часа, и отношение фагоцитарных индексов.

Анализ полученных данных при исследовании, нормы и отклонения

ИЗФ здорового человека должен быть равен единице. Данный анализ и его интерпретация, требующая определенных знаний, отражает всю картину иммунного состояния организма.

Лейкоцитоз

Фагоцитарная активность лейкоцитов при проведении исследований повышалась у мышей при изменении обычных условий жизни. Такое явление иногда возникает и у людей. Лейкоцитоз имеет физиологическую причину и может отмечаться у каждого человека. К примеру, повышенная активность белых кровяных телец проявляется при тривиальных бытовых факторах: стресс, перемена погоды, непривычная физическая нагрузка.

У женщин происходит скачок количества лейкоцитов во время беременности, при менструациях. Следует принять во внимание, что в подобных случаях увеличение лейкоцитов незначительно и происходит в одинаковых пропорциях для всех групп клеток. Для волнения нет повода. Однако существуют состояния, когда количество лейкоцитов возрастает в 2-3 раза выше нормы. Подобного рода рост клеток означает оборонительную реакцию и относится к патологическим.

Клетки разных групп растут непропорционально по причине заболевания или воспалительного процесса. Нейтрофильный лейкоцитоз - это когда клетки одной группы значительно преобладают по количеству. Наблюдается такой рост при инфекциях бактериального происхождения, остром воспалении, отравлениях, обширной кровопотере, инфарктах и при стрессе или шоке.

Ослабление оборонных свойств иммунитета

У мышей, над которыми проводились опыты по исследованию макрофагов крови число нейтрофилов к старению значительно сокращается. Нарушение фагоцитарной активности нейтрофилов способствует снижению природного свойства организма бороться с заболеваниями и выводить шлаки и токсины. Примерно такая же практика снижения числа защитных клеток присутствует и в теле человека.

Естественным, физиологическим иммунодефицитом может сопровождаться старение. Также иммунитет снижает активность при радиоактивном облучении. Отчет Брауде говорит о том, что при однократном облучении мышей отмечается внезапное угнетение растворяющей способности макрофагов. Отсюда следует, что и у организма человека, облученного гамма- или альфа лучами, ослабевает иммунитет.

Занимательный факт: Когда у мышей возникает чувство тревоги и опасности, в крови неконтролируемо растет число лейкоцитов и их подвижность. Подобным образом организм животного приготавливается к гипотетической необходимости обороняться - купировать действие укусов, обеззараживать ранки. Этот алгоритм свойственен и человеку. В состоянии эмоционального напряжения содержание белых клеток в крови растет, формируя оборонительный барьер.

В реалиях сегодняшнего дня исследования крови на предмет иммунной защиты организма находят широкое применение.

Еще:

Разновидности лейкоцитов в крови, в чем их важность для человека?

Фагоцитоз -- процесс, при котором специально предназначенные для этого клетки крови и тканей организма (фагоциты) захватывают и переваривают твердые частицы. Открытие фагоцитоза принадлежит И. И. Мечникову. Он осуществляется двумя разновидностями клеток: циркулирующими в крови зернистыми лейкоцитами (гранулоцитами) и тканевыми макрофагами. У животных фагоцитировать могут также ооциты, плацентные клетки, клетки, выстилающие полость тела, пигментный эпителий сетчатки глаза.

Механизм фагоцитоза однотипен и включает 8 последовательных фаз: 1) хемотаксис (направленное движение фагоцита к объекту);

2) адгезия (прикрепление к объекту);

3) активация мембраны (актин-миозиновой системы фагоцита);

4) начало собственно фагоцитоза, связанное с образованием вокруг поглощаемой частицы псевдоподий;

5) образование фагосомы (поглощаемая частица оказывается заключенной в вакуоль благодаря надвиганию на нее плазматической мембраны фагоцита подобно застежке-молнии;

6) слияние фагосомы с лизосомами;

7) уничтожение и переваривание;

8) выброс продуктов деградации из клетки.

Фагоцитозу часто предшествует процесс опсонизации (от греч. opsoniazo -- снабжать пищей, питать) объекта. Объектом является клетка, которая несет чужеродную информацию. Инициатором этого процесса является образование на поверхности клетки комплекса антиген-антитело. Антитела, локализуясь на поверхности чужеродной клетки, стимулируют активацию и присоединение к ним белков системы комплемента. Образующийся комплекс действует как активатор остальных стадий фагоцитоза.

Более детально этапы фагоцитоза выглядят следующим образом:

1. Хемотаксис. Чужеродные клетки (опсонизированные или неопсонизированные) посылают в окружающую среду хемотаксические сигналы, в направлении которых начинает двигаться фагоцит. Ранее других клеток в очаг воспаления мигрируют нейтрофилы, позже - макрофаги.

2. Адгезия фагоцитов к объекту. Обусловлена наличием на поверхности фагоцитов рецепторов для молекул, представленных на поверхности объекта (собственных или связавшихся с ним). Акт адгезии включает две фазы: распознавание чужеродного (специфический процесс) и прикрепление, или собственно адгезию (неспецифический процесс). В случае если отсутствует предварительное специфическое распознавание чужеродных клеток, адгезия фагоцитирующей клетки к объекту фагоцитоза происходит крайне медленно.

3. Активация мембраны. На этой стадии осуществляется подготовка объекта к погружению. Происходит активация протеинкиназы С, выход ионов кальция из внутриклеточных депо. Большое значение играют переходы золь-гель в системе клеточных коллоидов и актино-миозиновые перестройки.

4. Погружение. Происходит обволакивание объекта. В процессе фагоцитоза плазматическая мембрана макрофага при помощи образованных ею выступающих складок захватывает объект фагоцитоза и обволакивает его.

5. Образование фагосомы. Происходит замыкание мембраны, погружение объекта с частью мембраны фагоцита внутрь клетки. Образующаяся при этом небольшая вакуоль называется фагосомой.

6. Образование фаголизосомы. Слияние фагосомы с лизосомами, в результате чего образуются оптимальные условия для бактериолиза и расщепления убитой клетки.

7. Киллинг и расщепление. В фагосоме захваченная чужеродная клетка гибнет. Для осуществления киллинга макрофаг продуцирует и секретирует в фагосому реакционноспособные производные кислорода. Основные вещества, участвующие в бактериолизе: пероксид водорода, продукты азотного метаболизма, лизоцим и др. Процесс разрушения бактериальных клеток завершается благодаря активности протеаз, нуклеаз, липаз и других ферментов.

Переваривание захваченного и убитого материала - завершающий этап фагоцитоза. Для этого с фагосомой, содержащей объект фагоцитоза, объединяются лизосомы, которые содержат более 25 различных ферментов, в число которых входит большое количество гидролитических энзимов. В фагосоме происходит активация всех этих ферментов, так называемый метаболический взрыв, в результате которого фагоцитированный объект переваривается.

8. Выброс продуктов деградации.

Фагоцитоз может быть:

ѕ завершенным (киллинг и переваривание прошло успешно);

ѕ незавершенным (для ряда патогенов фагоцитоз является необходимой ступенью их жизненного цикла, например, у микобактерий и гонококков).

Изучение показателей фагоцитоза имеет значение в комплексном анализе и диагностике иммунодефицитных состояний: часто рецидивирующих гнойно-воспалительных процессах, длительно не заживающих ран, склонности к послеоперационным осложнениям.

Для исследования фагоцитарной функции используют:

ѕ подсчет абсолютного числа фагоцитов (нейтрофилов и моноцитов);

ѕ оценку интенсивности поглощения микробов фагоцитами;

ѕ определение способности фагоцитирующих клеток переваривать захваченные микробы.

Наиболее информативным для оценки активности фагоцитоза считают фагоцитарное число, количество активных фагоцитов и индекс завершенности фагоцитоза.

Наиболее распространенным методом количественного определения и характеристики морфологических дефектов нейтрофилов является лейкограмма и цитологические исследования с использованием световой и электронной микроскопии.

Для определения хемотаксической активности нейтрофилов применяют метод исследования миграции лейкоцитов с использованием камеры Бойдена. Метод основан на разделении микропористым фильтром в растворе двух реагирующих компонентов: нейтрофилов и хемотаксических агентов (например, C5a), которые помещаются в нижнюю камеру и создают концентрационный градиент. Помещенные в верхнюю камеру нейтрофилы мигрируют вдоль градиента и собираются на нижней поверхности фильтра. После стандартной инкубации фильтры извлекают, окрашивают и подсчитывают количество клеток. Метод довольно прост и отличается весьма высокой воспроизводимостью. Этот же принцип лежит в основе метода клеточной миграции под агарозным гелем, который используется для определения хемотаксического индекса.

Для фагоцитарного числа норма -- 5-10 микробных частиц. Это среднее количество микробов, поглощенных одним нейтрофилом крови. Характеризует поглотительную способность нейтрофилов. Определяется путем подсчета количества поглощенных бактерий одной клеткой после инкубации клеток пациента со стандартными препаратами St.aureus или E.coli и окраски полученных мазков. Модификацией этого теста является метод определения бактерицидной активности, при котором отмытая суспензия клеток инкубируется с бактериальной суспензией, затем смесь наносится на поверхность кровяного агара и через определенное время подсчитывается количество выросших бактериальных колоний. Оба метода требуют стандартизации для использования в каждой конкретной лаборатории и сведений об антибиотикотерапии, которая может быть причиной недостоверных результатов или ошибок в их интерпретации.

Фагоцитарная емкость крови в норме -- 12,5-25х10 9 на 1 л крови. Это количество микробов, которое могут поглотить нейтрофилы 1 л крови.

Фагоцитарный показатель в норме 65-95%. Это относительное количество нейтрофилов (выраженное в процентах), участвующих в фагоцитозе.

Количество активных фагоцитов в норме -- 1,6-5,0х10 9 в 1 л крови. Это абсолютное количество фагоцитирующих нейтрофилов в 1 л крови.

Индекс завершенности фагоцитоза в норме -- более 1. Он отражает переваривающую способность фагоцитов.

Фагоцитарная активность нейтрофилов обычно повышается в начале развития воспалительного процесса. Ее снижение ведет к хронизации воспалительного процесса и поддержанию аутоиммунного процесса, так как при этом нарушается функция разрушения и выведения иммунных комплексов из организма.

Спонтанный тест с НСТ(нитросиний тетразолий) - в норме у взрослых количество НСТ-положительных нейтрофилов составляет до 10%. Этот тест позволяет оценить состояние кислородзависимого механизма бактерицидности фагоцитов (гранулоцитов) крови in vitro. Он характеризует состояние и степень активации внутриклеточной НАДФ-Н-оксидазной антибактериальной системы. Феномен респираторного (или метаболического) взрыва связан со значительным увеличением кислорода, поглощаемого лейкоцитами при фагоцитозе, в результате чего происходит образование супероксидного радикала (О 3-) и перекиси водорода. Все эти соединения обладают микробоцидными свойствами, и их идентификация представляет собой важный этап в оценке функциональной активности фагоцитарных клеток.

Показатели НСТ-теста повышаются в начальный период острых бактериальных инфекций, тогда как при подостром и хроническом течении инфекционного процесса они снижаются.

Снижение спонтанного теста с НСТ характерно для хронизации воспалительного процесса, врожденных дефектов фагоцитарной системы, иммунодефицитов, злокачественных новообразований, тяжелых ожогов, травм, недостаточности питания, лечения некоторыми лекарственными препаратами, воздействия ионизирующего излучения.

Повышение спонтанного теста с НСТ отмечают при антигенном раздражении вследствие острого бактериального воспаления, лейкоцитозе, усилении антителозависимой цитотоксичности фагоцитов, аутоаллергических заболеваниях, аллергии.

Активированный тест с НСТ используется для определения фагоцитарной метаболической (кислородо-зависимой) активности нейтрофилов. Тест включает в себя инкубацию нейтрофилов с НСТ in vitro, и по формированию нерастворимых окрашенных зерен формазана можно судить о восстановлении НСТ супероксидным радикалом, образующимся при активации фагоцитов. Отсутствие осадка свидетельствует о неспособности клеточной популяции фагоцитов к метаболизму.

В норме у взрослого человека количество НСТ-положительных нейтрофилов составляет 40-80%. Снижение показателей активированного НСТ-теста нейтрофилов ниже 40% и моноцитов ниже 87% свидетельствует о недостаточности фагоцитоза.